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發布日期:2024/5/17 8:48:00

原代細胞可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA,可轉染絕大多數原代細胞。目前,無論國外還是國內,原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題,市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高效轉染絕大多數原代細胞,獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲,也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數原代細胞,RFect PM 細胞轉染陽性率都在 80%以上,而轉染細胞死亡率不到 10%。

 

 

 

原代細胞分離和培養基本步驟

1、器官和組織的選擇

盡可能的去除不必要的組織和血跡。


2、原代細胞的分離

(1)應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。

(2)根據組織來源不同,可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。


3、原代細胞的培養:

(1)PriCells原代細胞特制培養基

(2)PriCells原代細胞特制添加物

(3)優質胎牛血清


4、細胞的培養和鑒定:

PriCells原代細胞鑒定試劑盒


4、原代細胞的傳代、保存

(1)傳代:依椐細胞的生長狀態,生長的細胞1:2或1:3進行傳代。

(2)保存:DMSO+培養液+血清

按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。


5、原代細胞的復蘇

(1)取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。

(2)吸出細胞懸液,并加10倍以上培養液。

(3)用培養液適當稀釋后接種培養瓶,放入37℃CO2培養箱靜置培養。

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